微生物限度检查中，除薄膜过滤法外还有哪些常用方法？

在微生物限度检查中，除薄膜过滤法外，常用方法还包括平皿计数法、最可能数法(MPN 法)、涂布法等，这些方法适用于不同类型的供试品(如非抑菌性、水溶性、固体或半固体等)，具体原理和应用场景如下：

一、平皿计数法(倾注法)

这是最经典、最常用的方法之一，适用于水溶性、非抑菌性供试品(如普通口服液、注射剂、片剂等)，原理是将供试品稀释后与熔化的培养基混合，培养后计数菌落。

操作步骤：

供试品稀释：取供试品适量，用无菌稀释液(如 pH 7.0 缓冲液、0.9% 无菌氯化钠溶液)进行梯度稀释(通常 10 倍递增，如 1:10、1:100、1:1000 等)，选择可能含 10-300 个菌落的稀释级。

倾注培养：取每个稀释级的供试品溶液 1mL，加入无菌培养皿中，立即倾注 45-50℃的熔化培养基(如营养琼脂用于细菌，玫瑰红钠琼脂用于霉菌和酵母菌)，轻轻摇匀使供试品与培养基混合均匀，待凝固。

培养与计数：细菌培养于 30-35℃、48 小时;霉菌和酵母菌培养于 20-25℃、72 小时，计数每个平板的菌落数，按稀释倍数计算供试品中的微生物总数。

特点：

操作简便，成本低，适用于多数非抑菌性样品。

缺点：若供试品有颜色或颗粒，可能干扰菌落观察;抑菌性供试品需先去除抑菌作用(如添加中和剂)，否则结果偏低。

二、最可能数法(MPN 法)

适用于微生物含量低、均匀性差或难以用平皿计数的供试品(如某些中药制剂、水质样品)，原理是通过不同稀释度的供试品在培养基中生长的阳性管数，查表估算微生物数量(基于统计学概率)。

操作步骤：

供试品稀释：将供试品进行系列稀释(通常 3 个稀释级，每个稀释级 3-5 支试管)。

接种与培养：每个稀释级取 1mL 供试品溶液，加入含液体培养基的试管中(如胆盐乳糖培养基用于大肠菌群)，培养后观察试管是否浑浊(表示有微生物生长，即阳性管)。

结果计算：根据阳性管数，查 MPN 表得到每克(或每毫升)供试品中微生物的最可能数。

特点：

灵敏度高，适合低菌数样品，但结果为估算值，精密度较低。

常用于控制菌检查(如大肠菌群、沙门菌)，而非总菌数计数。

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三、涂布法

与倾注法类似，但操作顺序不同，适用于对热敏感的微生物(如某些酵母菌、霉菌)或需观察菌落形态的场景。

操作步骤：

供试品稀释：同倾注法，制备系列稀释液。

培养基凝固与涂布：先将熔化的培养基倾注于培养皿中，凝固后作为底层;取 1mL 供试品稀释液滴加在培养基表面，用无菌 L 型玻璃棒均匀涂布，待液体吸收。

培养与计数：培养条件同倾注法，计数表面生长的菌落。

特点：

避免高温培养基对微生物的损伤，菌落生长在表面，形态清晰，便于计数和鉴别。

缺点：操作较倾注法多一步涂布，且若供试品中微生物附着在颗粒上，可能导致涂布不均。

四、直接接种法

主要用于控制菌检查(如金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌等特定致病菌)，原理是将供试品直接接种到选择性培养基中，观察是否有目标菌生长。

操作步骤：

取规定量供试品(如 10g 或 10mL)，直接加入适量选择性增菌培养基(如亚碲酸盐肉汤用于金黄色葡萄球菌)。

培养后，若培养基浑浊或出现特征性生长，进一步通过划线分离、生化试验或血清学试验确认是否为目标菌。

特点：

针对性强，用于特定致病菌的筛查，操作简单，但仅能定性(判断是否存在)，无法定量。返回搜狐，查看更多